进入接种室后，先用75%的酒精棉球擦拭手部，风干后点燃酒精灯。将一支母种与一支待接培养基试管放在左手掌心，用手指夹紧试管，右手拿接种针。扭动并稍拉出管口棉塞，针头和下部外杆蘸酒精后在酒精灯火焰上烧灼灭菌。用无名指和小指，或小指与手掌配合夹住两个试管的棉塞并拔出，试管在火焰上灼烧，管口尽量靠近火焰的无菌区。将接种针迅速插入原种试管内，为防止烧灼的针头烫死菌种，可先将针头接触管壁上的蒸发水滴或未长菌丝的培养基边沿，然后迅速挑取豆粒大小的一块菌索连同少量培养基，移入待接试管培养基的中部，移菌时不能让挑取的菌种接触管壁。取出接种针，将两个试管口在火焰上烧灼，棉塞塞入试管内部分也在火焰上微燎并迅速塞入各自试管口。一支母种可扩大转接20支左右试管。